LIETUVOS RESPUBLIKOS ŽEMĖS ŪKIO MINISTRO

Į S A K Y M A S

DĖL TECHNINIO REGLAMENTO PATVIRTINIMO

2001 m. rugsėjo 28 d. Nr. 341

Vilnius

Įgyvendindamas Lietuvos Respublikos Vyriausybės 2001 m. vasario 22 d. nutarimu Nr. 192 „Dėl Lietuvos pasirengimo narystei Europos Sąjungoje programos (Nacionalinė ACQUIS priėmimo programa) teisės derinimo priemonių ir ACQUIS įgyvendinimo priemonių 2001 metų planų patvirtinimo“ (Žin., 2001, Nr. 18-554, Nr. 63-2290, Nr. 68-2448) patvirtintą teisės derinimo priemonių 2001 metų planą (priemonės kodas 3,4,2,14-T-B11),

Tvirtinu Sitosterolio arba stigmasterolio nustatymo svieste arba koncentruotame svieste techninį reglamentą (pridedama).

APLINKOS MINISTRAS,

L. E. ŽEMĖS ŪKIO MINISTRO PAREIGAS                                          ARŪNAS KUNDROTAS

______________

PATVIRTINTA

Lietuvos Respublikos žemės ūkio ministro

2001 m. rugsėjo 28 d. įsakymu Nr. 341

SITOSTEROLIO ARBA STIGMASTEROLIO NUSTATYMO SVIESTE ARBA KONCENTRUOTAME SVIESTE TECHNINIS REGLAMENTAS

Parengtas pagal 2001 m. sausio 9 d. Europos Komisijos reglamento (EC) Nr. 213/2001, nustatančio detalias Tarybos reglamento (EC) Nr. 1255/1999 taikymo taisykles, susijusias su pieno produktų analizės ir kokybės vertinimo metodais, ir papildančio Europos Komisijos reglamentus (EC) Nr. 2771/1999 ir (EC) Nr. 2799/1999, XIV priedą.

1. Šis techninis reglamentas nustato pamatinį analizės metodą, skirtą augalinės kilmės riebalinių priedų – sitosterolio arba stigmasterolio nustatymui bei jų kiekybiniam įvertinimui svieste pagal KPN kodą 0405.10 ir koncentruotame svieste pagal KPN kodą 0405.90 (priedas).

2. Reglamento taikymo tvarką apibrėžia žemės ūkio ministro 2000 m. liepos 17 d. įsakymu Nr. 223 „Dėl techninių reglamentų patvirtinimo“ (Žin., 2000, Nr. 99-3145) patvirtintas Pieno ir pieno produktų pamatinių analizės metodų taikymo techninis reglamentas.

SUDERINTA

Valstybinės maisto ir veterinarijos

tarnybos direktorius

K. Lukauskas

2001 m. rugsėjo 11 d.

______________

Priedas

SITOSTEROLIO ARBA STIGMASTEROLIO NUSTATYMAS SVIESTE ARBA KONCENTRUOTAME SVIESTE

1. Taikymo sritis

Šis metodas skirtas sitosterolio arba stigmasterolio kiekiui nustatyti svieste ir koncentruotame svieste (dujiniu chromatografu su kapiliarine kolonėle).

2. Metodo esmė

Sitosterolis(C₂₉H₅₀O) ir stigmasterolis (C₂₉H₄₈O) – į augalinių riebalų sudėtį įeinantys vienhidroksiliai nesotieji hidroaromatiniai sudėtingieji alkoholiai. Sitosteroliu priimta laikyti ß- sitosterolio ir 22 dihidro-ß-sitosterolio suma. Kiti steroliai laikomi nesvarbiais. Sitosteroliams ir stigmasteroliams nustatyti pieno riebalai yra muilinami kalio hidroksidu etanolio tirpale, o nemuilinta dalis ekstrahuojama dietileteriu. Steroliai yra transformuojami į trimetilsililo eterius ir analizuojami dujiniu chromatografu su kapiliarine kolonėle, vidiniu etalonu naudojant betuliną.

3. Įranga:

3.1. 150 ml tūrio muilinimo kolba, sujungta su grįžtamuoju šaldytuvu;

3.2. 500 ml dalomieji piltuvai;

3.3. 250 ml tūrio kolbos;

3.4. 250 ml tūrio indai dietileterio likučiams surinkti;

3.5. stiklo kolonėlė, 350 mm x 20 mm, su gludinto stiklo kamščiu;

3.6. vandens vonia arba izogaubtas;

3.7. 2 ml tūrio mėgintuvėliai;

3.8. dujinis chromatografas, naudojamas su kapiliarine kolonėle ir srauto paskirstymo sistema bei susidedantis iš:

3.8.1. kolonėlių termostatavimo kameros, palaikančios norimą temperatūrą ± 1°C tikslumu;

3.8.2. išgarinimo mazgo su reguliuojama temperatūra;

3.8.3. liepsna jonizuojamo detektoriaus ir konverterio – stiprintuvo;

3.8.4. integratoriaus – registratoriaus, tinkamo naudoti su konverteriu – stiprintuvu (3.8.3);

3.9. kvarcinio stiklo kapiliarinė kolonėlė, visiškai padengta su BP1 (100% dimetilpolisiloksanas) arba ekvivalentiška jai vienodo storio (0,25 µm) ne judamąja faze. Kolonėlė turi būti tinkama lanosterolio ir sitosterolio trimetilsililo dariniams atskirti. Jos ilgis 12 m, vidinis skersmuo 0,2 mm;

3.10. 1 µl chromatografinis mikrošvirkštas su adatėle.

4. Reagentai:

Visi naudojami reagentai turi būti analiziškai gryni. Naudojamas distiliuotas ar ekvivalentiško grynumo vanduo;

4.1. etanolis turi būti ne mažesnio kaip 95% grynumo;

4.2. kalio hidroksidas: 60% vandeninis tirpalas;

4.3. betulinas, mažiausiai 99% grynumo;

4.3.1. betulino tirpalai dietileteryje (4.4).

4.3.1.1. sitosteroliui nustatyti naudojamo betulino tirpalo koncentracija turi būti 1,0 mg/ml;

4.3.1.2. stigmasteroliui nustatyti naudojamo betulino tirpalo koncentracija turi būti 0,4 mg/ml;

4.4. dietileteris, chemiškai grynas (neturintis peroksidų ir kitų priemaišų);

4.5. natrio sulfatas, bevandenis, granuliuotas, prieš tai 2 valandas džiovintas 102°C temperatūroje;

4.6. sililinimo reagentas – pavyzdžiui TRI-SIL (Pierce Chemical Co, Cat No 49001), arba ekvivalentiškas jam. TRI-SIL yra degus, toksiškas, korozinis (ėdantis). Laboratorijos personalas turi žinoti darbo su TRI – SIL saugumo techniką;

4.7. lanosterolis;

4.8. sitosterolis, ne mažesnio kaip 90% grynumo.

PASTABA. Kalibravimui naudojamų etaloninių medžiagų grynumas turi būti nustatytas normalizavimo būdu. Tarkime, kad bandinyje esantys visi sitosteroliai yra pavaizduoti chromatogramoje: visų jų smailių plotas sudaro 100% ir kad visų šių darinių detekcijos signalai yra vienodi. Sistemos linijiškumas turi būti patikrintas tiriamų koncentracijų ribose.

4.8.1. sitosterolio etaloninis tirpalas. Ruošiamas apie 0,5 mg/ml koncentracijos (W1) sitosterolio (4.8) tirpalas dietileteryje (4.4) 0,001 mg/ml tikslumu;

4.9. stigmasterolis. Žinomo, ne mažesnio kaip 90% grynumo;

4.9.1. stigmasterolio etaloninis tirpalas. Ruošiamas 0,2 mg/ml koncentracijos stigmasterolio (4.9) tirpalas dietileteryje (4.4) 0,001 mg/ml tikslumu;

4.10. kontrolinio mišinio ruošimas. Ruošiamas mišinys, turintis 0,05 mg/ml lanosterolio (4.7) ir 0,5 mg/ml sitosterolio (4.8) dietileteryje (4.4).

5. Metodas:

5.1. Etaloninio tirpalo ruošimas chromatografuoti. Vidinio etalono tirpalas (4.3.1) pilamas į atitinkamą sterolio etaloninį tirpalą tokiu pat būdu, kaip jis pilamas į muilintą bandinį (žr 5.2.2);

5.1.1. sitosterolio etaloninio chromatografinio tirpalo ruošimas: pilama 1 ml sitosterolio etaloninio tirpalo (4.8.1) į kiekvieną iš dviejų mėgintuvėlių (3.7) ir azoto srautu pašalinamas dietileteris. Pilama 1 ml vidinio etalono tirpalo (4.3.1.1) ir azoto srautu pašalinamas dietileteris;

5.1.2. stigmasterolio etaloninio chromatografinio tirpalo ruošimas: pilama 1 ml etaloninio stigmasterolio tirpalo (4.9.1) į kiekvieną iš dviejų mėgintuvėlių (3.7) ir azoto srautu pašalinamas dietileteris. Pilama 1 ml vidinio etalono tirpalo (4.3.1.2) ir azoto srautu pašalinamas dietileteris.

5.2. Muilinimas:

5.2.1. sviesto mėginiai išlydomi ne aukštesnėje kaip 35°C temperatūroje ir gerai išmaišomi. Į 150 ml kolbą (3.1) 1 mg tikslumu atsveriama maždaug 1 g sviesto (W1) arba koncentruoto sviesto (W2). Įpilama 50 ml etanolio (4.1) ir 10 ml kalio hidroksido tirpalo (4.2). Prijungiamas grįžtamasis šaldytuvas ir kaitinama 30 min. apie 75°C temperatūroje. Gautas kondensatas kolboje aušinamas iki kambario (apie 20°C) temperatūros;

5.2.2. į kolbą įpilama 1 ml vidinio etalono tirpalo (4.3.1.1), jeigu nustatinėjamas sitosterolis, arba 1 ml vidinio etalono tirpalo (4.3.1.2), jeigu nustatinėjamas stigmasterolis. Atidžiai maišoma. Kolbos turinys kiekybiškai perpilamas į 500 ml dalomąjį piltuvą (3.2). Kolba išplaunama įpilant 50 ml vandens ir 250 ml dietileterio (4.4). Dalomasis piltuvas intensyviai purtomas apie 2 minutes ir leidžiama fazėms atsiskirti. Išleidžiamas apatinis vandens sluoksnis ir eterio sluoksnis keturiskart po 100 ml vandens purtant praplaunamas.

PASTABA. Vengti emulsijos susidarymo. Labai svarbu, kad du pirmieji plovimai vandeniu būtų atlikti labai atsargiai (10 apvertimų). Trečiojo plovimo metu intensyviai purtoma apie 30 sek. Jeigu susidaro emulsija, ją galima suardyti įpilant 5-10 ml etanolio. Jeigu įpilama etanolio, kiti du plovimai vandeniu atliekami itin intensyviai;

5.2.3. švarus, be muilo eterio sluoksnis perleidžiamas per stiklinę kolonėlę (3.5), užpildytą 30 g bevandenio natrio sulfato (4.5). Eteris surenkamas į 250 ml kolbą (3.3). Įdedama viena virimą reguliuojanti granulė ir distiliuojama beveik iki sausumo vandens vonioje arba izogaubte, kruopščiai surenkant tirpiklio likučius.

PASTABA. Jeigu mėginių ekstraktai yra visiškai išdžiovinami per aukštoje temperatūroje, gali būti sterolio nuostolių.

5.3. Trimetilsililo eterio paruošimas:

5.3.1. kolboje esantys eterio tirpalo likučiai perpilami į 2 ml mėgintuvėlį (3.7) su 2 ml dietileterio ir eteris pašalinamas naudojant azoto srautą. Kolba du kartus išplaunama po 2 ml dietileteriu, perpilant tirpalą į mėgintuvėlį ir kiekvieną kartą pašalinant eterį azotu;

5.3.2. mėginys sililinamas įpilant 1 ml TRI – SIL (4.6). Užkemšama kolba ir, intensyviai purtant, ištirpinama. Jeigu per 5 min. ištirpinti nepavyksta, pašildoma iki 65–70°C temperatūros. Prieš įpurškiant į dujinį chromatografą, paliekama pastovėti dar 5 min. Etaloniniai tirpalai sililinami tuo pačiu būdu kaip ir mėginiai. Kontrolinis sterolio mišinys (4.10) sililinamas taip pat kaip ir mėginiai.

PASTABA. Sililinimas turi būti vykdomas bevandenėje aplinkoje. Nevisišką betulino sililinimą parodo antroji smailė, artima betulino smailei. Etanolio priemaišos trukdo sililinimui. Taip atsitinka dėl nepakankamo plovimo ekstrahavimo stadijoje. Jeigu ši problema lieka, reikia atlikti penktą plovimą, 30 sek. intensyviai purtant dalijamąjį piltuvą.

5.4. Dujų chromatografinė analizė:

5.4.1. Nustatomos sąlygos analizei atlikti:

5.4.1.1. dujinis chromatografas įjungiamas pagal gamintojo instrukciją;

5.4.1.2. rekomenduojamos šios chromatografijos sąlygos:

- kolonėlės temperatūra – 265°C;

- įpurškimo temperatūra – 265°C;

- detektoriaus temperatūra – 300°C;

- dujų srovės greitis -0,6 ml/min.;

- vandenilio slėgis – 84 kPa;

- oro slėgis -155 kPa;

- jautrumas nuo 10:1 iki 50:1. Jautrumas turi būti optimizuotas pagal gamintojo instrukcijos reikalavimus. Detektoriaus signalo linijiškumas turi būti patikrintas analizuojamų koncentracijų intervale.

PASTABA. Ypač svarbu, kad reguliariai būtų valoma inžektoriaus gilzė.

- įpurškiamas kiekis yra 1 µl trimetilsililo eterio tirpalo (5.3).

Prieš pradedant chromatografinę analizę, leidžiama sistemai stabilizuotis.

Rekomenduojamos chromatografijos sąlygos gali būti keičiamos, kad gaunamos chromatogramos atitiktų tokius reikalavimus:

- sitosterolio smailė turi būti visiškai atskirta nuo linosterolio. 1 piešinyje parodyta tipiška chromatograma, kuri turėtų būti gauta iš sililinto kontrolinio mišinio (4.10);

- sterolių santykinis sulaikymo laikas apytikriai turi būti:

cholesterolio – 1,0;

stigmasterolio – 1,3;

sitosterolio – 1,5;

betulino – 2,5;

- betulinui sulaikymo laikas – apie 24 minutės.

5.4.2. Analizė:

5.4.2.1. įpurškiama 1 µl sililinto etaloninio tirpalo (stigmasterolio ar sitosterolio) ir sureguliuojami integratoriaus parametrai. Dar įpurškiama 1 µl sililinto etaloninio tirpalo perskaičiavimo koeficientams pagal betuliną nustatyti;

5.4.2.2. įpurškiama 1 µl sililinto mėginio tirpalo ir matuojamas smailės plotas. Kiekvienas chromatografinis plovimas turi būti vienodai vertinamas (sulyginamas) pagal įpurkštus etalonus. Kiekvienam gretimam plovimui patartina daryti šešis mėginio įpurškimus.

PASTABA. Stigmasterolio smailės plotų suma (integracija) parodyta 1, 2 ir 3 matavimo taškuose 2 b piešinyje.

Įvertinant bendrą sitosterolio kiekį, sitosterolio smailės plotas sumuojasi su 22 dihidro-ß-sitosterolio (stigmastanolio) smailės, išeinančios tuoj po ß-sitosterolio, plotu (3 b piešinys).

6. Rezultatų apskaičiavimas:

6.1. nustatomi sterolio ir betulino smailių plotai abiejuose etaloniniuose tirpaluose, įvertinančiuose vieno konkretaus mėginio partiją, ir apskaičiuojamas R1:

Sterolio smailės ploto vidurkis etaloniniame tirpale

R1= ––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––

Betulino smailės ploto vidurkis etaloniniame tirpale

Nustatoma sterolio smailių plotų suma (sitosterolio plius stigmasterolio smailių plotas) ir betulino smailės plotas mėginyje ir skaičiuojamas R2:

Sterolio smailės plotas mėginyje

R2= ––––––––––––––––––––––––––

Betulino smailės plotas mėginyje

W1=sterolio kiekis (mg), esantis 1 ml etaloninio tirpalo (4.8.1 arba 4.9.1).

W2 = mėginio kiekis (g) (5.2.1).

P = sterolio grynumas (4.8 arba 4.9).

Sterolio kiekis mėginyje (mg/kg)

7. Metodo tikslumas:

7.1. Sviestas:

7.1.1. pakartojamumas:

7.1.1.1. stigmasterolis. Skirtumas dviejų atskirų analizių rezultatų, gautų tuo pat metu arba su nedidelėmis pertraukomis to paties analitiko, toje pačioje laboratorijoje, naudojant tą pačią įrangą ir identiškas medžiagas, neturi viršyti 19,3 mg/kg;

7.1.1.2. sitosterolis. Skirtumas dviejų atskirų analizių rezultatų, gautų tuo pat metu arba su nedidelėmis pertraukomis to paties analitiko, toje pačioje laboratorijoje, naudojant tą pačią įrangą ir identiškas medžiagas, neturi viršyti 23,0 mg/kg;

7.1.2. atitikimas:

7.1.2.1. stigmasterolis. Skirtumas dviejų atskirų ir nepriklausomų analizių rezultatų, gautų skirtingose laboratorijose dviejų analitikų, naudojant skirtingą įrangą ir identiškas medžiagas, neturi viršyti 31,9 mg/kg;

7.1.2.2. sitosterolis. Skirtumas dviejų atskirų ir nepriklausomų analizių rezultatų, gautų skirtingose laboratorijose dviejų analitikų, naudojant skirtingą įrangą ir identiškas medžiagas, neturi viršyti 8,7 % santykinai nustatyto vidurkio.

PASTABA. Duomenų tikslumas buvo nustatytas vadovaujantis 1992 m. aštuonių laboratorijų atliktu eksperimentu, kiekvienai iš jų pateikiant po 6 mėginius (po 3 dvigubus slaptus) sitosteroliui ir po 6 mėginius (po 3 dvigubus slaptus) stigmasteroliui.

7.2. Koncentruotas sviestas:

7.2.1. pakartojamumas:

7.2.1.1. stigmasterolis. Skirtumas dviejų atskirų analizių rezultatų, gautų tuo pat metu arba su nedidelėmis pertraukomis to paties analitiko, toje pačioje laboratorijoje, naudojant tą pačią įrangą ir identiškas medžiagas, neturi viršyti 10,2 mg/kg;

7.2.1.2. sitosterolis. Skirtumas dviejų atskirų analizių rezultatų, gautų tuo pat metu arba su nedidelėmis pertraukomis to paties analitiko, toje pačioje laboratorijoje, naudojant tą pačią įrangą ir identiškas medžiagas, neturi viršyti 3,6 % santykinai nustatyto vidurkio;

7.2.2. atitikimas:

7.2.2.1. stigmasterolis. Skirtumas dviejų atskirų ir nepriklausomų analizių rezultatų, gautų skirtingose laboratorijose dviejų analitikų, naudojant skirtingą įrangą ir identiškas medžiagas, neturi viršyti 25,3 mg/kg;

7.2.2.2. sitosterolis. Skirtumas dviejų atskirų ir nepriklausomų analizių rezultatų, gautų skirtingose laboratorijose dviejų analitikų, naudojant skirtingą įrangą ir identiškas medžiagas, neturi viršyti 8,9 % santykinai nustatyto vidurkio.

PASTABA. Duomenų tikslumas buvo nustatytas vadovaujantis 1991 m. devynių laboratorijų atliktu eksperimentu, kiekvienai iš jų pateikiant po 6 mėginius (po 3 dvigubus slaptus) stigmasteroliui ir po 6 mėginius (po 3 dvigubus slaptus) sitosteroliui.

8. Leistinas nuokrypis:

8.1. Tiriamųjų etaloninių sterolių pasiskirstymo produkte vienodumui nustatyti iš vieno bandino turi būti paimti trys mėginiai.

8.2. Sviestas:

8.2.1. Stigmasterolis:

8.2.1.1. įdedant 150 g 95% grynumo stigmasterolio į 1 t sviesto jo koncentracija bus 142,5 mg/kg, arba įdedant 170 g 85,0% grynumo stigmasterolio į 1 t sviesto jo koncentracija bus 144,5 mg/kg;

8.2.1.2. produkto trijų mėginių tyrimo rezultatai, gauti tikrinant įdėto stigmasterolio pasiskirstymo vienodumą, ir mažiausia gauto rezultato vertė yra lyginama su šiais reikalavimais (atsižvelgiant į absoliutųjį verčių skirtumą su 95% tikimybe (Cr D95):

116,0 mg/kg (ne mažiau kaip 95% pridėto kiekio, esant stigmasterolio grynumui 95%),

118,0 mg/kg (ne mažiau kaip 95% pridėto kiekio, esant stigmasterolio grynumui 85%),

81,0 mg/kg (ne mažiau kaip 70% pridėto kiekio, esant stigmasterolio grynumui 95%),

82,0 mg/kg (ne mažiau kaip 70% pridėto kiekio, esant stigmasterolio grynumui 85%),

8.2.1.3. mažiausia stigmasterolio koncentracijos vertė etaloniniame mėginyje apskaičiuojama interpoliuojant intervale atitinkamai tarp 116,0 mg/kg ir 81,0 mg/kg arba tarp 118,0 mg/kg ir 82,0 mg/kg;

8.2.2. Sitosterolis:

8.2.2.1. įdedant 600 g 90% grynumo sitosterolio į 1 t sviesto, jo koncentracija bus 540 mg/kg;

8.2.2.2. produkto trijų mėginių tyrimo rezultatai, gauti tikrinant įdėto sitosterolio pasiskirstymo vienodumą ir mažiausia gauto rezultato vertė yra lyginama su šiais reikalavimais (atsižvelgiant į absoliutųjį verčių skirtumą su 95% tikimybe (Cr D95):

486,0 mg/kg (ne mažiau kaip 95% pridėto kiekio, esant sitosterolio grynumui 90%),

358,0 mg/kg (ne mažiau kaip 70% pridėto kiekio, esant sitosterolio grynumui 90%);

8.2.2.3. mažiausia sitosterolio koncentracijos vertė etaloniniame mėginyje apskaičiuojama interpoliuojant intervale atitinkamai tarp 486,0 mg/kg ir 358,0 mg/kg.

8.3. Koncentruotas sviestas:

8.3.1. Stigmasterolis:

8.3.1.1. įdedant 150 g 95% grynumo stigmasterolio į 1 t koncentruoto sviesto, jo koncentracija bus 142,5 mg/kg, arba įdedant 170 g 85,0% grynumo stigmasterolio į 1 t koncentruoto sviesto, jo koncentracija bus 144,5 mg/kg;

8.3.1.2. produkto trijų mėginių tyrimo rezultatai, gauti tikrinant įdėto stigmasterolio pasiskirstymo vienodumą, ir mažiausia gauto rezultato vertė yra lyginama su šiais reikalavimais (atsižvelgiant į absoliutųjį verčių skirtumą su 95% tikimybe (Cr D95):

120,0 mg/kg (ne mažiau kaip 95% pridėto kiekio, esant stigmasterolio grynumui 95%),

122,0 mg/kg (ne mažiau kaip 95% pridėto kiekio, esant stigmasterolio grynumui 85%),

84,0 mg/kg (ne mažiau kaip 70% pridėto kiekio, esant stigmasterolio grynumui 95%),

86,0 mg/kg (ne mažiau kaip 70% pridėto kiekio, esant stigmasterolio grynumui 85%);

8.3.1.3 mažiausia stigmasterolio koncentracijos vertė etaloniniame mėginyje apskaičiuojama interpoliuojant intervale atitinkamai tarp 120,0 mg/kg ir 84,0 mg/kg arba 122,0 mg/kg ir 86,0 mg/kg;

8.3.2. Sitosterolis:

8.3.2.1. įdedant 600 g 90% grynumo sitosterolio į 1 t koncentruoto sviesto, jo koncentracija bus 540 mg/kg;

8.3.2.2. produkto trijų mėginių tyrimo rezultatai, gauti tikrinant įdėto sitosterolio pasiskirstymo vienodumą ir mažiausia gauto rezultato vertė yra lyginama su šiais reikalavimais (atsižvelgiant į absoliutųjį verčių skirtumą su 95% tikimybe (Cr D95):

486,0 mg/kg (ne mažiau kaip 95% pridėto kiekio, esant sitosterolio grynumui 90%),

358,0 mg/kg (ne mažiau kaip 70% pridėto kiekio, esant sitosterolio grynumui 90%);

8.3.2.3. mažiausia sitosterolio koncentracijos vertė etaloniniame mėginyje apskaičiuojama interpoliuojant intervale atitinkamai tarp 486,0 mg/kg ir 358,0 mg/kg.

1 paveikslas. Bandomojo mišinio skyrimo chromatograma

Visiškas skyrimas yra pageidautinas, t. y. prieš pasirodant sitosterolio smailei, lanosterolio smailės pėdsakas turi grįžti į bazinę liniją. Taip pat leidžiamas nevisiškas skyrimas.

2 a paveikslas                                                                                  2 b paveikslas

Stigmasterolio standartas                                                               Sviesto mėginys su pridėtu    stigmasteroliu

3 a paveikslas                                                               3 b paveikslas

Sitosterolio standartas                                                  Sviesto mėginys su pridėtu b-sitosteroliu

______________